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如何選擇符合實(shí)驗(yàn)要求的核酸染料?

  • 發(fā)布日期:2022-05-27      瀏覽次數(shù):1074
    •   如何選擇符合實(shí)驗(yàn)要求的核酸染料?
        核酸染料是一種靈敏、穩(wěn)定和相對(duì)安全的熒光核酸染色試劑,是生物實(shí)驗(yàn)中*的一分子,尤其是在核酸檢測(cè)相關(guān)試驗(yàn)中,所以核酸染料對(duì)于分子生物學(xué)相關(guān)專業(yè)的學(xué)生來(lái)說(shuō)并不陌生,該如何選擇適合自己使用的核酸染料呢?以下從幾個(gè)方面來(lái)說(shuō)明:
        1、安全性:如果選擇EB替代染料,那么染料的安全性就是一個(gè)非常重要的指標(biāo)。安全性評(píng)估主要的檢測(cè)有Ames測(cè)試、細(xì)胞滲透性實(shí)驗(yàn)、染色體畸變和正向突變分析、口服毒性分析等。在安全性方面,具有較多檢測(cè)項(xiàng)目和機(jī)構(gòu)出具檢測(cè)報(bào)告的核酸染料,安全性可能會(huì)更高;另外在一些報(bào)道或?qū)Ρ葦?shù)據(jù)中,我們也可根據(jù)它們可能的原料來(lái)判斷它們的安全性。
        2、穩(wěn)定性:核酸染料的穩(wěn)定性和在各種條件下的染色效果,會(huì)直接影響觀察到的染色結(jié)果。
        3、靈敏度:幾乎所有的EB替代染料都其染料的靈敏度至少不低于EB,甚至高于EB,具體到試驗(yàn)內(nèi)容上,只要不是有特殊的需求,一般都能滿足。
        4、遷移率:由于核酸染料最終都會(huì)結(jié)合到DNA上,才能通過(guò)染料從而對(duì)DNA進(jìn)行分析,這也就意味著如果采用點(diǎn)染法或膠染法進(jìn)行核酸檢測(cè)時(shí),根據(jù)使用的染料不同,核酸染料或多或少會(huì)對(duì)核酸的遷移率甚至帶型產(chǎn)生影響。
        7-AAD,是一種核酸染料,與DNA結(jié)合后可發(fā)出強(qiáng)烈的熒光,其熒光特性與PI相似,可被488nm氬離子激光激發(fā),但其發(fā)射光譜較PI窄,且發(fā)射波長(zhǎng)更長(zhǎng),對(duì)其他檢測(cè)通道的干擾更小,在多色熒光分析中是PI的*替代品,可與多種488激發(fā)光激發(fā)的熒光染料聯(lián)合使用,如FITC,PE等。
        另外,7-AAD是一種非滲透性熒光染料。該染料不能透過(guò)活細(xì)胞的細(xì)胞膜,但可穿透膜損傷細(xì)胞如晚期凋亡細(xì)胞或者壞死細(xì)胞的細(xì)胞膜并與其內(nèi)的DNA結(jié)合,可用來(lái)區(qū)分存活的早期細(xì)胞和壞死或晚期凋亡細(xì)胞,廣泛用于流式細(xì)胞儀。

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